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核酸快速銀染試劑盒
 產品貨號: RTS5101
 產品名稱: 核酸快速銀染試劑盒
 產品價格/規格: 25次 450元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2019-07-23
詳細信息   訪問次數:次

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    產品編號

    規格

    貯存

    RTS5101

    25

    常溫

    儲存條件

    常溫保存,開封后一年有效。

    產品簡介

    核酸快速銀染試劑盒(Fast Silver Stain Kit for Nucleic Acids)是一種快速簡單、可用于聚丙烯酰胺凝膠中的核酸檢測的試劑盒。其檢測原理是: 銀離子(Ag+)可與核酸形成穩定的復合物,隨后 Ag+在堿性環境下被還原劑如甲醛還原成銀顆粒,后者通過顯色可把核酸電泳條帶染成黑褐色。該方法檢測靈敏度比 EB 高達 200 倍,能檢測到10ng的 DNA條帶,常用于檢測 SSR 標記、SNP 標記等。

    本試劑盒可足夠用于25塊常規的8×10cm凝膠的銀染。

    說明書后附有實驗記錄表格,方便記錄實驗步驟。

    產品組成:

    產品編號

    產品名稱

    規格

    貯存

    RTS5101-1

    試劑A-核酸銀染染色增敏液(10×)

    250 ml

    常溫;

    濃縮液,用前按照標簽加入無水乙醇

    RTS5101-2

    試劑B-核酸銀染染色加速液(10×)

    250 ml

    常溫

    RTS5101-3

    試劑C-核酸銀染銀溶液(100×)

    26 ml

    常溫,避光

    RTS5101-4

    試劑D-核酸銀染基本顯色液(10×)

    250 ml

    常溫

    RTS5101-5

    試劑E-核酸銀染顯色加速液(500×)

    5 ml

    常溫,避光

    ● 注意事項:

    1. 由于銀染非常靈敏,操作時請注意盡量使用高純度的水,并確保所使用的器皿非常清潔,最好使用潔凈的玻璃器皿。操作時必須戴手套,避免皮膚和凝膠直接接觸。

    2. 需自備無水乙醇及MilliQ級純水。

    3. 下述使用說明中各種溶液的使用量適用于大小為8×10cm厚度為0.75-1mm的凝膠。對于更大的凝膠,各種溶液的使用量需按凝膠面積的比例放大,對于更厚的凝膠,作用時間需按照厚度的比例適當延長。

    4. 本說明書所指的常溫溫度為20-25,操作溫度較低時由于溶液的擴散能力下降,各步驟需適當延長時間。

    5. 銀染基本顯色液(10×)在低溫環境下可能會出現沉淀,可在30-37水浴中溶解,并充分混勻后使用。

     

    使用方法:

    . 漂洗步驟:

    電泳結束后,凝膠中加入100ml MilliQ級純水,在搖床上常溫搖動2分鐘,搖動速度為60-70rpm;

    重復此步驟1。

    . 銀染步驟:

    1. 銀染:

    棄水,加入100ml即用型染色液,在搖床上常溫搖動5分鐘,搖動速度為60-70rpm。

    即用型染色液配制量  100 ml

    超純水

    79 ml

    試劑A-核酸銀染染色增敏液(10×)

    10 ml

    試劑B-核酸銀染染色加速液(10×)

    10 ml

    試劑C-核酸銀染銀溶液(100×)

    1 ml

    注:即用型染色液配制后需在20分鐘內使用。

    2. 水洗滌:

    棄原有溶液,加入100ml MilliQ級純水或雙蒸水,在搖床上室溫搖動15-20秒,搖動速度為60-70rpm。

    注意:水洗滌的時間不能超過20。

    . 顯色步驟:

    棄水,加入100ml銀染顯色液,在搖床上室溫搖動3-10分鐘,直至出現比較理想的預期核酸條帶,搖動速度為60-70rpm。

    銀染顯色液配制量                 100 ml

    超純水

    89.8 ml

    試劑D-核酸銀染基本顯色液(10×)

    10 ml

    試劑E-核酸銀染顯色加速液(500×)

    0.2 ml

    注:銀染顯色加速液(500X)有刺激性氣味,建議在通風櫥內操作;

    銀染顯色液配制后需在20分鐘內使用。

    終止步驟:

    棄銀染顯色液,加入100ml MilliQ級純水,在搖床上常溫搖動3-5分鐘,搖動速度為60-70rpm。

    . 保存:

    可在MilliQ級純水中保存;或采用適當的方式制備成干膠。

    常見問題:

    1.  背景太深:

    a. 顯色時間過長。通常顯色反應會在10分鐘內結束,顯色反應時間過長會導致背景很深。

    b. 水的純度太低。需使用大于16 MΩ·cm的高純度水。

    2.  核酸條帶非常淺:

    a. 銀染后水洗滌時間過長。在銀溶液染色時需嚴格控制水洗滌的時間,水洗滌的時間不能超過20秒,否則會導致過多的銀離子被洗去,導致檢測靈敏度下降。

    b. 核酸銀染顯色加速液(500×)失效。核酸銀染顯色加速液(500×)不能低溫保存,低溫保存會導致加速液失效。

    3.  凝膠上出現小點或其它非核酸的痕跡:

    a. 凝膠沒有充分被溶液浸沒。請注意選擇大小合適的容器,并加入足量的各種溶液,同時需保持適當的混勻速度確保凝膠可以被溶液浸沒。

    b. 用于銀染的容器沒有充分洗滌干凈。容器需先用洗滌劑充分洗滌,隨后用自來水充分沖洗,最后用高純度水再洗滌數次。該容器最好能專用于銀染,并注意避免各種可能的污染。

    c. 指紋或其它壓痕。請注意戴手套操作,切勿直接接觸皮膚。操作時請注意盡量勿擠壓、折疊或摩擦凝膠。

    d.  有金屬物質接觸凝膠。金屬物質例如金屬鑷子等接觸凝膠會出現非特異性痕跡。

     

    核酸銀染實驗記錄表格

    實驗日期:

     

     

    25-30分鐘

    標記√

    起始時間

    漂洗步驟

    水漂洗

    2×2 min

     

     

    銀染步驟

     

     

     

     

     

    銀染

    5 min

     

     

     

    水漂洗

    1 min

     

     

    顯色步驟

    顯色

    3-10 min

     

     

    終止步驟

    水漂洗

    5 min

     

     

    保存

     

     

     

     

     




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