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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
 產品貨號: CK0115
 產品名稱: Cell Counting Kit-8(CCK-8)
 產品價格/規格: 100次/500次 100元/450元
 產品說明書: 暫無
 更新時間: 2019-10-18
詳細信息   訪問次數:次

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  • 細胞增殖-毒性檢測試劑盒

    Cell Counting Kit-8(CCK-8)

    產品組成:

    組分貨號

    名稱

    規格

    貯存

    CK0115-01

    Cell Counting Kit-8(CCK-8)

    1 ml100次)

    4,避光保存

    CK0115-02

    Cell Counting Kit-8(CCK-8)

    5×1 ml500次)

    4,避光保存

    ●     產品簡介:

    CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。 WST-8是一種類似于 MTT的化合物,在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下,可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜(Formazan)。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。

    WST-8與傳統的MTT,XTT,MTS,WST-1相比有明顯的優點。首先,反應生成的formazan是水溶性的,可以省去后續的溶解步驟。其次,WST-8更加穩定,檢測線性范圍更寬,靈敏度更高。

    本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測,也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測,或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。

    本試劑盒檢測便捷,使用方便。僅含一管已經配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,無須再進行任何配制等操作。無須使用同位素,所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內完成。不必洗滌細胞,不必收集細胞,也不必采用額外的步驟去溶解甲臜。特別適用于大批量樣品的檢測。

    另外,酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。

    WST-8對細胞無明顯毒性。加入CCK-8溶液顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀板,使檢測時間更加靈活,便于找到最佳測定時間。

    本試劑盒可以測定100個或500個樣品。

    ●     保存條件:

    CCK-8 溶液在避光,0-5的條件下可以保存一年,如長期保存,可在-20下保存 2 年,如需經常使用請將試劑存放在 0-5,為防止背景值增加干擾實驗結果,請勿反復凍融。

    操作步驟:

    1.  在 96孔板中接種細胞懸液(100 μl /孔),通常細胞增殖實驗每孔約2000 個細胞,細胞毒

    性實驗每孔約5000 個細胞,具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等因素決定)。

    2.  按照實驗需要,進行培養并給予0-10 μl特定的藥物刺激,處理一段適當的時間(例如: 6,12,

    24或48小時)。

    3.  每孔加入10 μl CCK-8 溶液。如果起始的培養體積為200 μl,則需加入20 μl CCK-8溶液,以此類推??梢雜眉酉嚶α肯赴嘌?CCK-8但不加細胞的孔作為空白對照,若擔心所使用的藥物會干擾檢測,需設置加相應量細胞培養液、藥物和 CCK-8 溶液但不加細胞的孔作為空白對照。

    4.  在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時,具體時間可以通過預實驗確定。預實驗時可以在0.5、

    2和4 小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

    5.  用酶標儀測定在450 nm處的吸光值,若無450nm濾光片,可以使用420-480nm 的濾光

    片。如果樣品為高渾濁度的細胞懸液,可以使用大于 600nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定。

    6.  如果需要暫時不測定 OD值,可以向每孔中加入10 μl0.1MHCl 溶液或者1%(w/v)的 SDS溶液,避光保存在室溫,24 小時內吸光度不會發生變化。  

    注意事項:

    1.  使用96 孔板進行檢測時,如果細胞培養時間較長,請注意蒸發問題??山?6 孔板外圍一圈加培養基、水或 PBS保濕。同時,可以把96孔板置于培養箱內靠近水盤的位置以緩解蒸發。

    2.  培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而不同。在正式實驗前,建議先做預實驗摸索鋪板的細胞數量以及加入CCK-8 試劑后的培養時間。

    3.  鋪板時請注意保證每個孔細胞數量均勻,建議鋪板過程中注意時?;煸?,防止因細胞沉淀造成不均勻。加入CCK-8 后請前后左右輕輕晃動培養板數次,使培養基和CCK-8 溶液充分混勻。

    4.  本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,如果待測物質有氧化性或還原性,可在加CCK-8  之前更換新鮮培養基,去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

    5.  加入CCK-8 時,如果細胞培養時間較長,培養基顏色或 pH值已變化,建議換用新鮮的培養基。

    6.  用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。

    7.  本試劑盒系無菌灌裝生產。在使用過程中,請在生物安全柜內無菌操作,避免污染。


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