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產品分類
 
·PCR
 
 
 





植物基因組提取試劑盒
 產品貨號: RTG2404
 產品名稱: 植物基因組提取試劑盒
 產品價格/規格: 50次 400元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2019-07-23
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    試劑盒內容及保存:

    試劑盒組成

    RTG2404-0150次)

    貯存方式

    緩沖液AP1

    25 ml

    室溫

    緩沖液AP2

    10 ml

    室溫

    緩沖液AP3(濃縮液)

    15 ml

    室溫

    漂洗液PW濃縮液)

    15 ml

    室溫

    洗脫緩沖液EB

    15 ml

    室溫

    RNase A10 mg/ml

    300μl

    -20

    吸附柱CG(白色)

    50

    室溫

    過濾柱CF

    50

    室溫

    說明書

    1

     

    儲存條件和效期:

    本試劑盒在室溫(25℃左右)干燥條件下,可保存1年;更長時間的保存可置于2–8℃。2–8℃保存條件下,若溶液產生沉淀,應在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。單獨包裝的RNaseA收到后-20℃保存。

     

    產品簡介:

    本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統,能提取多種植物細胞/組織中的基因組DNA。離心吸附柱可以高效、專一吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大,純度高,質量穩定可靠。

    使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。

    提取得率:

    材料

    DNA得量(μg/100mg

    Arabidopsis

    3–4 μg

    Barley

    8–12 μg

    Maize

    15-20

    Pine

    20-25

    Potato

    4-6

    Rape

    2-4

    Spinach

    5-10

    Tobacco

    20-25

    Wheat

    25-30

     

    準備工作:

    1. 準備液氮;65℃水??;無水乙醇;1.5ml滅菌離心管。

    2. 按照標簽所示在緩沖液AP3和漂洗液PW中加入無水乙醇,混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存備用。

    3. 每次使用前請檢查緩沖液AP1,緩沖液AP2和緩沖液AP3是否有沉淀生成,如果出現沉淀,37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。

    操作步驟:

    如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

    1. 取適量植物新鮮組織500mg-1g加入液氮充分研磨,取約100mg粉末置于1.5ml離心管中,加入400 μl 緩沖液AP1和6 μl RNaseA (10mg/ml),漩渦震蕩1分鐘。

    2. 將離心管放在65℃水浴10分鐘,水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數次。

    3. 加入130 μl 緩沖液AP2,顛倒混勻,冰浴5分鐘。

    4. 12,000rpm離心5分鐘。

    注:此步驟離心去除去垢劑,蛋白以及多糖等雜質。

    5. 取上清(通常為400 μl)轉移到過濾柱CF中,12,000rpm 離心1分鐘。

    6. 將濾出液轉移到1.5 ml離心管中,加入1.5倍體積(例如400 μl的上清液加600 μl緩沖液AP3)緩沖液AP3(使用前請注意是否已經加入無水乙醇),立即顛倒混勻,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。

    7.吸取步驟6中的混合液加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm離心1分鐘,倒掉廢液,吸附柱CG放回收集管中。

    注:離心吸附柱的最大容積是700μl,如果一次不能完全上柱,可以分次上柱離心,保證全部溶液全部加到離心柱中。

    8.向吸附柱CG中加入500 μl漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm離心1分鐘,倒掉廢液,吸附柱CG放入收集管中。

    9.重復步驟8。

    10. 可選步驟:如果離心柱的吸附膜上有顏色,向吸附柱CG中加入500 μl無水乙醇,12,000 rpm離心1分鐘,倒掉廢液,吸附柱CG放入收集管中。

    11.將吸附柱CG放回廢液收集管中,12,000 rpm離心2分鐘。

    :此步驟非常重要,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。

    12.將吸附柱CG轉入一個干凈的1.5ml離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100 μl經65℃水浴預熱的洗脫緩沖液EB,室溫放置2分鐘,12,000 rpm g離心2分鐘。

    ;1. 洗脫緩沖液體積最好不少于50 μl,體積過小影響回收效率。

    2. 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內,pH值低于7.0會降低洗脫效率。

    13.  DNA產物-20保存。

     

    DNA濃度及純度檢測:

    基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。提取的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度??膳渲?.8-1.0%瓊脂糖凝膠,使用λ/HindIII判斷基因組的大小,完整的基因組大小應在23kb以上。使用分光光度計檢測時, OD260/OD280比值應為1.7–1.9之間,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水洗脫,比值可能偏低,但并不表明DNA純度不高。


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