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植物脯氨酸檢測試劑盒
 產品貨號: PP5040
 產品名稱: 植物脯氨酸檢測試劑盒
 產品價格/規格: 50次 400元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2019-10-18
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    植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)

    Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin

    產品組成:

    組分貨號

    名稱

    規格

    貯存

    PP5040-01

    試劑1-Pro裂解液

    100 ml

    RT

    PP5040-02

    試劑2-Pro標準液

    1 ml

    4℃

    PP5040-03

    試劑3-Pro顯色液

    50 ml

    RT 避光

    ●     產品簡介:

    脯氨酸(Proline,Pro)是一種環狀的α-亞氨基酸,呈中性,等電點為6.30,易溶于水。在正?;肪城榭魷賂彼岷拷系?,但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等),脯氨酸常有明顯積累,即積累指數與植物的抗逆性有關。植物脯氨酸檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是脯氨酸與茚三酮共熱發生反應,能產生穩定的紅色產物,以分光光度計測定處吸光度,在一定范圍內顏色深淺(即吸光度)與脯氨酸濃度成正比。

    該試劑盒不使用傳統的磺基水楊酸和甲苯等有害溶劑,經濟環保。

    該試劑盒主要用于測定植物組織中的游離脯氨酸含量,不適用于動物及醫療樣品中脯氨酸的測定。

    按照一次使用1 ml Pro顯色液計算,試劑盒可以使用50次。

    自備材料:

    植物根莖、葉子等;剪刀;螺蓋離心管或鎖蓋離心管或96孔板;1ml玻璃比色皿;分光光度計或酶標儀;水浴鍋或干浴器;離心機

    操作步驟:

    1、 樣本處理:

    取新鮮植物組織,清洗干凈,擦干,剪碎,迅速稱取, 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液(建議使用1.5ml螺口離心管或鎖蓋離心管),沸水浴或干浴處理20分鐘 (期間間歇混勻),10000rpm離心 2分鐘,上清即為脯氨酸提取液,4℃保存備用。待測提取液如不能及時測定,應置于-20℃保存,1-2天內穩定。

    2、 Pro顯色液的配制:

    把小管裝的茚三酮粉末,全部加入到茚三酮溶解液中,劇烈混勻至完全溶解,即配成Pro顯色液。注意:Pro顯色液具有一定腐蝕性,請小心操作。

    3、 配制系列脯氨酸標準溶液:

    取1ml 試劑1-Pro裂解液全部加入到裝有Pro標準液的小管中,混勻后徹底溶解,即配成的Pro標準液(100mg/ml)。

    取1 μl 100mg/ml 標準液加入到1ml Pro裂解液中,即配成100μg/ml Pro標準液待用。參照下表配制1-6號不同濃度的Pro標準溶液。

    編號

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

    100μg/ml Pro標準液加入量(ml

    0.01

    0.02

    0.04

    0.06

    0.08

    0.10

    0.15

    0.2

    Pro裂解液(ml

    0.49

    0.48

    0.46

    0.44

    0.42

    0.4

    0.35

    0.3

    脯氨酸含量(μg

    1

    2

    4

    6

    8

    10

    15

    20

    4、 樣品測定:

    = 1 \* GB3 分光光度計測定:參考下表設置反應混合液,依次加入試劑:

     

    空白管

    標準管

    測定管

    試劑1-Pro裂解液

    0.5 ml

    -

    -

    步驟1中的脯氨酸提取液

    -

    -

    0.5 ml

    Pro標準液(步驟31-8管)

    -

    0.5 ml

    -

    試劑3-Pro顯色液

    1 ml

    1 ml

    1 ml

    = 2 \* GB3 酶標儀測定:參考下表設置反應混合液,依次加入試劑:

     

    空白管

    標準管

    測定管

    試劑1-Pro裂解液

    50 μl

    -

    -

    步驟1中的脯氨酸提取液

    -

    -

    50 μl

    Pro標準液(步驟31-8管)

    -

    50 μl

    -

    試劑3-Pro顯色液

    100 μl

    100 μl

    100 μl

    ③ 水浴煮沸或干浴20分鐘,間歇混勻。加熱時務必注意避免液體暴沸濺出,可使用鎖蓋離心管或螺旋蓋離心管。

    ④ 冰浴或流水冷卻至室溫,10000 rpm離心 2分鐘,如發現沒有不溶物,也可以不離心。 

    ⑤ 取上清,用空白管作為對照,用分光光度計或酶標儀檢測分別測定反應混合液520nm吸光度值。 

    5、 計算:

    以系列脯氨酸標準(1-6號管)含量(μg)為橫坐標,以對應的吸光度為縱坐標,制作標準曲線,根據測定管的吸光度進而計算其脯氨酸含量。




    植物組織樣品脯氨酸含量(μg/g)=(C×VT)/(W×VS)

    C=從標準曲線上查得的脯氨酸含量(μg)

    VT=步驟1中脯氨酸提取液總體積(ml)

    W=步驟1中使用的樣品鮮重(g)

    VS=步驟4中測定時加入的脯氨酸提取液體積(ml)


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