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超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)
 產品貨號: RTD6127
 產品名稱: 超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)
 產品價格/規格: 10次 200元
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 更新時間: 2019-10-18
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  • 超低分子量蛋白Marker IV3.3-45kD


    產品編號及規格:

    RTD6127   10T50μl

    儲存條件: -20℃保存,開封后有效期12個月。

    產品簡介:本產品包含2種多肽和3種低分子量蛋白質組成,分子量范圍為3.3kD-45kD??梢雜美磁卸?/span> SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。 

     

     

    使用說明:

    第一次收到該產品,室溫融化后,徹底混勻,離心快甩將溶液完全收集到管底,根據需要適量分裝成小管,-20℃貯存,每次取一小管使用;本產品每次使用前,95加熱處理5分鐘。

    . 制膠:

    I 配制分離膠

    1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA19:1)、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。

    2.加入10%APSTEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

    4.靜置5-10分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

    表一  (一塊0.75mm mini膠用量)

     

    分離膠

    濃縮膠

     

    18T, 5%C /6.0 ml

    5T, 3.3%C/2 ml

    40% PAA19:1

    2.7 ml

    /

    40% PAA (29:1)

    /

    0.25 ml

    4×多肽電泳凝膠緩沖液

    1.5 ml

    0.5 ml

    乙二醇(電泳級)

    1.8 ml

    /

    ddH2O

    /

    1.25 ml

    10APS

    50-65 μl

    20 μl

    TEMED

    6 μl

    2 μl

    注:如非必須,不要使用1.0mm1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75mm的凝膠,這樣會減少電泳后染色和脫色的時間。


    II 配制濃縮膠

    去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

    1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA(29:1)和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。

    2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    3.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

    4.靜置20-30分鐘裝待凝膠聚合

    . 電泳:

    1. 取一管分裝好的Marker樣品,徹底融化,95加熱處理5分鐘,充分混勻后備用。

    2. 電泳前,將10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液(Cat No:CB010)用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的內外槽加入1×緩沖液,輕柔拔出梳子,將Marker或蛋白樣品(樣品已經過2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]處理)加入點樣孔,根據表二條件進行電泳,至藍色指示前沿至分離膠3/4位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2-3個小時。注:如果電泳時間過短,染色時,指示前沿容易遮擋小于5kd的小肽。

    表二 多肽電泳條件

    恒電壓

    150 V

    起始電流

    45-55 mA

    結束電流

     10-15 mA

    電泳時間

    2-3小時

    . 染色

    根據常規實驗步驟,用配方5和6(表三)進行染色和觀察。如果使用配方5進行染色時效果不好或考慮其毒性,請選擇本公司的FastBlue蛋白染色液(Cat NoRTD6202,該產品能在5分鐘之內完成蛋白的染色,不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離,是常規染色液的理想替代品。

    表三 小分子蛋白質SDS-PAGE電泳試劑配制

    1. 40%PAA29:1)(配制濃縮膠)

    Cat No:AC2914

       丙稀酰胺       38.67g

       甲叉雙丙稀酰胺 1.33g

     ddH2O溶解后定容至100 ml,過濾后使用。

    貯存:4避光保存

    2.  40% PAA19:1 (配制分離膠)

    Cat No:AC1914

    丙稀酰胺      38 g

    甲叉雙丙稀酰胺 2 g

    ddH2O溶解后定容至100 ml,過濾后使用。

    貯存:4避光保存

    3. 4×多肽電泳凝膠緩沖液(配制凝膠用)

    [3MTris; 0.3% SDS; pH8.45]

    Cat No:GB010

    Tris 182g

    ddH2O   300ml

    1.5 g SDS15ml 10 SDS

    HCl調pH值至8.45

    ddH2O定容至500ml

    貯存:4

    4. 10×Tris-Tricine-SDS電泳緩沖液

    [1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

    Cat No:CB010

    Tris 121.14g

    Tricine 179.2g

    SDS10g

    ddH2O溶解,定容至1000ml(不用調pH)。

    貯存:4

    注:使用前稀釋成緩沖液使用

    5. 染色液

    冰醋酸            100 ml

    甲醇              450 ml

    考馬斯亮藍G-250  0.25 g

                    450 ml

     

    6. 脫色液

    冰醋酸  100ml

          900ml

    7.  2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液(10ml

    Cat No:TP050

    1ml 1MTris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31g DTT(或者400μl β-巰基乙醇)

    2mg 考馬斯亮藍G-250

    用滅菌ddH2O定容至10ml

    混勻分裝-20貯存備用

     


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