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SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒
 產品貨號: RTD6116
 產品名稱: SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒
 產品價格/規格: 50次 300元
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 更新時間: 2019-10-18
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  • SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒(貨號:RTD6116)

    產品組成:

    貨號

    名稱

    規格

    保存條件

    AC2914-02

    40%PAA(29:1)

    100 ml

    4

    TS050-01

    4×Tris/SDS分離膠緩沖液 pH8.8

    100 ml

    4

    TS030-01

    4×Tris/SDS濃縮膠緩沖液 pH6.8

    50 ml

    4

    AP020P

    APS(干粉)

    0.5 g

    RT

    TA0761-01

    TEMED

    0.5ml

    4,避光

    PL080

    5×MonoColor蛋白上樣緩沖液(含還原劑)

    1 ml

    -20

    TG120P

    5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(干粉)

    1 L

    RT

    說明書

    一份

    產品簡介:

    本公司提供的SDS-PAGE蛋白電泳試劑盒包含凝膠制備以及蛋白電泳所需的全部試劑。本試劑盒可配制至少50塊常規大小的PAGE膠。

    使用說明:

    一 配制分離膠(各試劑使用量請參考表二)

    根據目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度(表一),再按照下面的分離膠配方表(表二)配制SDS-PAGE的分離膠(即下層膠)。

    表一 不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍:

    SDS-PAGE分離膠濃度

    最佳分離范圍

    6%

    50-150kD

    8%

    30-90kD

    10%

    20-80kD

    12%

    12-60kD

    15%

    10-40kD

    配制分離膠前,根據以下配方準備10% APS:

    10% APS配制-5 ml將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解后分裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少室溫存放時間,以防失效。10%APS在4℃有效期為一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10%APS。

    制備分離膠步驟:

    1.參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

    2.按照表二將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合;加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

    3.在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,使凝膠表面保持平整。

    4.靜置30-60分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面后,說明凝膠已聚合

    表二 SDS-PAGE分離膠配方表

    組份

    不同凝膠體積對應各組份的取樣量(ml

     

     

     

     

    8                                   5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    2.7

    5.4

    8.1

    10.8

    4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1

    2

    3

    4

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2

    10                                 5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    2.45

    4.9

    7.35

    9.8

    4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2

    12                                 5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    2.2

    4.4

    6.6

    8.8

    4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1.5

    3

    4.5

    6

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2

    15                                 5ml           10ml          15ml           20ml                          

    H2O

    1.825

    3.65

    5.475

    7.3

    4×Tris/SDS分離膠buffer pH8.8

    1.25

    2.5

    3.75

    5

    40 PAA29:1

    1.875

    3.75

    5.625

    7.

    TEMED

    0.005

    0.01

    0.015

    0.02

    10 APS

    0.05

    0.1

    0.15

    0.2


    二 濃縮膠制備:

    1.去除覆蓋在分離膠上的水層。

    2.按照表三將不同體積成分在一個小燒杯或試管中混合;加入10%過硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

    3.將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

    4.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

    5.靜置30-60分鐘,等待濃縮膠聚合。






    表三 SDS-PAGE濃縮膠(4%)配方表

    組份

    不同凝膠體積對應各組份的取樣量(ml

    2 ml

    4 ml

    5 ml

    10 ml

    H2O

    1.3

    2.6

    3.25

    6.5

    4×Tris/SDS濃縮膠buffer pH6.8

    0.5

    1

    1.25

    2.5

    40 PAA29:1

    0.2

    0.4

    0.5

    1

    TEMED

    0.002

    0.004

    0.005

    0.01

    10 APS

    0.02

    0.04

    0.05

    0.1

    三 電泳:

    凝膠凝固好后,根據以下配方準備電泳緩沖液。

    5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液的配制-1 L:將一包5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液干粉全部倒入1L燒杯中,加入約900 ml水徹底溶解,用水定容至1 L,即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(此溶液不用調節pH值)。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。

    在電泳槽的內槽內加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕的撥出梳子,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。上樣,電泳,一般是濃縮膠80V,分離膠120V恒壓,等指示前沿溴酚蘭電泳到分離膠下緣后,結束電泳,染色或者進行下一步實驗。



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